Buyclindamycin.ru

Современные методы лечения

Материалы

· Реактивы

В работе использованы трис, акриламид, N,N’-метилен(бис)акриламид, персульфат аммония (Sigma), ТЕМЕД, уксусная кислота, этанол, SDS, бромфеноловый синий, 2-меркаптоэтанол, агар (Difco), дрожжевой экстракт (Sigma), ИПТГ (Sigma), бакто-триптон (Difco).

Т4-ДНК-лигаза (Fermentas, #EL0014), Т4-полинуклеотидкиназа (Fermentas, #EK0031), Taq ДНК-полимераза (Fermentas), эндонуклеазы рестрикции Nco I, Xho I, Xba I, Bam HI, Bgl II, Hind III, Eco RI.

· Плазмидный вектор

pET32b(+) (Novagen)

pTWIN1 (New England Biolabs)

· Бактериальные штаммы

E.coli ER2566 ( В работе использовались настольные центрифуги Z 383K(Hermile) и Centrifuge 5430R (Eppendorf), (Heraeus); амплификатор (PTC-0200 DNA Engine Cycler) (Bio-Rad); сухой термостат DVE (Heraeus); качалку с термостатируемой камерой Certomat (ETH); источники постоянного тока: 2197 Power Supply (LKB), 2002 Power Supply (LKB), 2301 Macrodrive-l (LKB), 2301 Macrodrive-5 (LKB), Electrophoresis Power Supply EPS500/400 (Pharmacia); ультразвуковой дезинтегратор (Branson) MSE, pH-метр PB-11 (Sartorius); Спектрофотометр SmartSpec Plus (Bio-Rad, США); ламинарный шкаф Gelaire (Flow Lab.); УФ-трансиллюминатор (Desaga); весы аналитические (Mettler PM460); автоматические микропипетки (Gilson, Eppendorf).

· Питательные среды

LB: 1% бакто-триптон, 0,5% дрожжевой экстракт, 1% NaCl, pH 7.3

YT-бульон: 0,8 % бакто-триптон, 0,5 % дрожжевой экстракт, 0,5 % NaCl.

SOB: 2% бакто-триптон, 0,5% дрожжевой экстракт, 0,01 М NaCl, 0,01 М KCl, 0,01 М MgCl2, 0,01 М MgSO4, pH 7,5

· Буферные растворы

50´ТАЕ (50-кратный буфер для электрофореза ДНК в агарозе):

М трис-ацетат, рН 8,0, 1 М Na-ацетат, 0,9 М NaCl, 50 мМ ЭДТА.

Буферные системы для денатурирующего белкового электрофореза:

Буфер для приготовления образцов - 125 мМ трис-HCl, рН 6,8, 3% SDS, 20% глицерин, 3% 2-меркаптоэтанол, 0,05% бромфеноловый синий;

Стоковый раствор 40% акриламид/1,3% N,N'-метилен-бисакриламид в воде.

LTB (буфер для разделяющего геля) 375 мМ трис-HCl, рН 8,8, 0,1%SDS;

UTB (буфер для концентрирующего геля) 125 мМ трис-HCl, рН 6,8, 0,1% SDS.

ЧБуфер для Taq-полимеразы: 67 мМ трис-HCl, 16,6 мМ (NH4)2SO4, 0,01 % TWEEN-20, 1,5 мМ MgCl2.

Ч Буфер для ДНК-лигазы фага Т4: 25 мМ трис-HCl, рН 7,8, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ДТТ, 0,4 мМ рАТР.

ЧБуфер для полинуклеотидкиназы фага Т4: 50 мМ трис-HCl, рН 7,5, 10 мМ MgCl2, 10 мМ ДТТ.

X Buffer Tango™ (Fermentas): 33 мМ трис-ацетат (pH 7,9 при 37°C), 10 мМ ацетат магния, 66 мМ ацетат калия, 0,1мг/мл БСА.

ЧБуфер для эндонуклеаз рестрикции Green (Fermentas):10мМ ТрисHCl (pH 7,5 при 37°C), 10 мМ MgCl2, 50 мМ NaCl, 0,1 мг/мл БСА.

ЧБуфер для эндонуклеаз рестрикции Orange (Fermentas):10мМ ТрисHCl (pH 7,5 при 37°C), 10 мМ MgCl2, 100 мМ NaCl, 0,1 мг/мл БСА.